NEOFECT™ DNA transfection reagent
使用说明

一 产品介绍

Neofect™ DNA transfection reagent 是由威尼斯人登录网址(北京)生物科技有限公司研发合成的以非脂
阳离子聚合物为主的转染试剂,是新一代非病毒转染试剂。 可以与 DNA 形成稳定的复合物,透过细
膜进入细胞内,并保护 DNA 免受核酸酶的降解。该试剂对细胞毒性很小,可在含血清与抗生素的完全
养基中充分发挥作用。对多数培养细胞都有较高的转染效率(不同种类细胞的转染效率可有明显差异)
本品推荐用于贴壁动物细胞的转染,用于质粒等 DNA的转染。

二 产品特征

高效、低毒、广谱、操作简单。

三 实验流程 (以 6孔板为例)

1.细胞铺板
提前一天将细胞种植在六孔板中,以转染时细胞密度在 60%-80%为宜。
2.转染过程
(1) 在转染前 2小时,移除细胞上原有的培养基,换为新鲜的完全培养基。
(2) 将 2µg质粒 DNA用 100 μL无血清稀释液稀释,充分混匀后制成 DNA稀释液。
注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM,无血清 DMEM或 150 mM NaCl溶液。
(3) 向 DNA稀释液中直接加入 2 μL Neofect™,轻柔混匀,室温静置 15-30分钟。转染复合物制备完成
(4) 将转染复合物加入细胞培养基中,轻柔混匀。
(5) 继续培养 24-48小时,收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。

(table.1)不同细胞培养容器转染用量

细胞培养容器 表面积 稀释液体积 DNA的量 Neofect™的量 培养基总量
96-well 0.3 cm2 10 µl 0.1 µg 0.1 µl 100 µl
48-well 0.7 cm2 20 µl 0.2 µg 0.2 µl 200 µl
24-well 1.9 cm2 50 µl 0.5 µg 0.5 µl 500 µl
12-well 3.8 cm2 50 µl 1 µg 1 µl 1 ml
6-well/35 mm dish 10 cm2 100 µl 2 µg 2 µl 2 ml
60 mm dish/T25 flask 21 cm2 200 µl 4 µg 4 µl 4 ml
100 mm dish/T75 flask 58 cm2 500 µl 10 µg 10 µl 10 ml

四 储存与安全

本品常温运输,储存于4℃,有效期12个月。

五 使用限制

本转染试剂仅限于科研用途。

注:
1)本产品对细胞非常温和,一般情况下转染后无需进行换液操作
2)使用本产品转染后,一般在24小时开始进入表达高峰期,36小时到48小时达到表达高峰,相对于脂质体转染试剂,达到峰值的时间延后约6到12小时。